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通蔚生物淺析探針法PCR檢測(cè)試劑盒的原理有哪些
更新時(shí)間:2023-09-22   點(diǎn)擊次數(shù):994次

探針法PCR檢測(cè)試劑盒的原理在于PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收。剛開始時(shí),探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5’端-3’端外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成同步。


常用于熒光免疫法中標(biāo)記抗原或抗體,亦可用于微環(huán)境,如表面活性劑膠束、雙分子膜、蛋白質(zhì)活性位點(diǎn)等處微觀特性的探測(cè)。通常要求探針的摩爾吸光系數(shù)大,熒光量子產(chǎn)率高;熒光發(fā)射波長處于長波且有較大的斯托克斯位移;用于免疫分析時(shí),與抗原或抗體的結(jié)合不應(yīng)影響它們的活性。


目前常用的熒光探針有熒光素類探針、無機(jī)離子熒光探針、熒光量子點(diǎn)、分子信標(biāo)等。熒光探針除應(yīng)用于核酸和蛋白質(zhì)的定量分析外,在核酸染色、DNA電泳、核酸分子雜交、定量PCR技術(shù)以及DNA測(cè)序上都有著廣泛的應(yīng)用。


探針法PCR檢測(cè)試劑盒設(shè)備簡單、操作簡便、分析速度快及靈敏度高?;瘜W(xué)發(fā)光成像分析是將化學(xué)發(fā)光與成像技術(shù)相結(jié)合,從而具有分辨率高、多樣品同時(shí)檢測(cè)、光譜響應(yīng)范圍寬以及靈敏度高等特點(diǎn),已廣泛應(yīng)用于凝膠、蛋白印記及微陣列芯片中的化學(xué)發(fā)光信號(hào)檢測(cè)。


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